| Congresso Brasileiro de Microbiologia 2023 | Resumo: 1466-1 | ||||
Resumo:Mandioca, também conhecida como macaxeira ou aipim é um alimento bastante consumido no Brasil, cuja entrecasca é um resíduo agrícola, rico em amido. Assim, a entrecasca da mandioca é uma fonte de amido barata e disponível em abundância. As enzimas capazes de hidrolisar as ligações glicosídicas do amido são chamadas de enzimas amilolíticas, como as α-amilases, α-glicosidases, pululanases, entre outras. As amilases são enzimas bastante importantes para biotecnologia, constituindo cerca de 25% do mercado mundial de enzimas, pois encontram aplicações nas indústrias de detergentes, de alimentos, têxtil, química, farmacêutica, produção de álcool, papel e cerveja. Um fator limitante para a utilização das amilases é o alto custo de produção, demostrando a relevância da prospecção de novos microrganismos produtores de enzimas amilolíticas a partir de resíduos agroindustriais. Este trabalho objetivou avaliar a produção de enzimas amilolíticas em meio líquido Khanna, suplementado com a farinha da entrecasca de macaxeira, pelos isolados fúngicos C6I5 e C7I3 que foram obtidos em um processo de compostagem e apresentaram capacidade de produção de enzimas amilolíticas em meio sólido. Os fungos foram mantidos em meio BDA e 1 mL de uma suspensão de esporos (107 esporos/mL) foi utilizada como inóculo para o meio líquido. A produção de amilase total foi feita em Erlenmeyers com 250 mL de capacidade, nos quais foram adicionados 100 mL de meio Khanna, suplementado com 1% de farinha da entrecasca da macaxeira (m:v), com e sem agitação (200 rpm), os ensaios foram feitos em triplicata. Para a otimização da produção enzimática utilizou-se o fungo que teve melhor desempenho na fase anterior em meio Khanna, avaliando-se o efeito das variáveis independentes (pH; concentração de extrato de levedura (EL); e temperatura) sobre a produção de amilase total, por meio de um delineamento fatorial 2³, com triplicata no ponto central, totalizando 11 ensaios. A atividade de amilase total foi determinada pela incubação do extrato enzimático em uma solução de amido (1%) e tampão acetato de sódio, a reação foi interrompida usando o ácido 3,5 dinitrosalicílico, com a atividade sendo expressa pela quantificação da liberação de açúcares redutores em espectrofotômetro a 540nm. O isolado fúngico C6I5 destacou-se, apresentando a maior produção enzimática em condição estacionária (3,58 U/mL). No delineamento fatorial, as maiores produções enzimáticas foram de 5,16 U/mL e 4,44 U/mL verificadas nos ensaios E2 (pH 7; temperatura de 28ºC; 0,04g de EL) e E6 (pH 7; temperatura de 38°C; 0,04g de EL), respectivamente. As análises estatísticas indicam que o aumento da concentração do extrato de levedura teve efeito negativo e o aumento da temperatura teve efeito positivo sobre a produção enzimática, ambos sem significância estatística. O aumento do pH teve efeito significativamente positivo (90% de confiança) sobre a produção enzimática, enquanto a interação entre pH e extrato de levedura teve efeito negativo, estatisticamente significativo. Os resultados demonstram que a compostagem é uma fonte valiosa de microrganismos com potencial de aplicação biotecnológica. Palavras-chave: enzimas amilolíticas, entrecasca da macaxeira, meio líquido Khanna, isolados fúngicos, delineamento fatorial Agência de fomento:Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) | |||||